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        課堂 | 大腦研究:樣本形態(tài)和基因表達(dá)之間的相互關(guān)系

        更新時間:2018-05-03      點(diǎn)擊次數(shù):1496

        高單個神經(jīng)元切割

        實現(xiàn)基因表達(dá)的可靠分析

        帕金森癥是一種常見的進(jìn)行性中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病,它與黑質(zhì)中釋放多巴胺的神經(jīng)元細(xì)胞死亡有關(guān)。受疾病感染的多巴胺釋放神經(jīng)元與健康神經(jīng)元在基因表達(dá)譜上存在差異,而這種差異有助于確定治療的靶基因。

        對于基因表達(dá)分析來說,研究整體組織是徒勞無意義的,單細(xì)胞分辨率才是關(guān)鍵。如果分析多巴胺釋放神經(jīng)元與所有其他腦細(xì)胞的混合物,會影響研究結(jié)果。

        采用徠卡的激光顯微切割 (LMD) 方法能夠特異地從帕金森癥患者尸檢組織中分離單個多巴胺能神經(jīng)元,從而進(jìn)行分析,消除因檢測不均質(zhì)細(xì)胞群體造成的誤判。

        研究領(lǐng)域

        •    阿爾茨海默癥

        •    發(fā)育生物學(xué)

        •    衰老

        •    腫瘤組織的突變分析

        •    其他疾病

        參考文獻(xiàn)

        •    Casli et al., Neuroscience, 2016

        •    Schlaudraff et al., Neurobiology of Aging, 2014, 35 (10)

        •    Bandyopadhyay et al., JoVE, 2014, 83

        •    Gründemann et al., NAR, 2008, 36 (7)

        •    Ramirez et al., Nature Genetics, 2006, 38

        單細(xì)胞精度的基因表達(dá)分析工作流程

         

        樣本制備

        使用冷凍切片機(jī)切片,隨后將制備好的切片放在特制的 LMD 載玻片上。

        固定和染色

        將組織固定并染色,用于后續(xù)顯微成像和激光顯微切割。可使用染色儀實現(xiàn)自動化。

        可視化和定義 ROI

        自動生成樣本概覽??梢宰詣踊蚴謩虞p松識別和標(biāo)注感興趣區(qū)域 (ROI)。

        激光顯微切割

        可使用Leica LMD系統(tǒng),自動切割ROI區(qū)域,并借助重力將切割下來的組織收集到 PCR管或 8 聯(lián)管等標(biāo)準(zhǔn)且經(jīng)濟(jì)的實驗室耗材之中。

        基因表達(dá)分析

        使用傳統(tǒng)的 qPCR ,或者使用微陣列或下一代測序 (NGS) 等技術(shù)進(jìn)行基因表達(dá)分析。

        您將享受如下優(yōu)勢:

        無接觸式單細(xì)胞切割

         

        徠卡提供的激光顯微切割系統(tǒng)是實現(xiàn)單細(xì)胞高精度切割的理想之選。您可以一邊觀察,一邊輕松切割單個細(xì)胞。無接觸切割有助于防止核糖核酸酶等產(chǎn)生的污染。

        使用徠卡顯微系統(tǒng)提供 的LMD 系統(tǒng),通過重力收集分離純化后的物質(zhì)

        激光顯微切割前、后的小鼠大腦冷凍切片。甲苯胺藍(lán)染色。

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